1．2．4穩定性實驗
取白屈菜紅堿標準溶液2mL，按2．3節標準曲線下方法每隔1h測定其吸收度，觀察吸光度值隨時間變化情況。
1．2．5精密度實驗
取對照品溶液2．0mL，按1．2．3節方法制備標準品供試液和空白對照液，在425rim波長處測定，重復測定5次。
2試驗結果
2．1最大吸收波長確定
由圖1可以看出，用白屈菜紅堿作對照，溴甲酚綠染色比色法測定生物堿得最大吸$t~-K為425nnl。
根據1．2．3所得的數據，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。經統計處理，得線形回歸方程為：Y=4．2566一0．0066，R2=0．9994。由圖2可以看出，生物堿濃度在0—0．2mg／mL范圍之內具有良好的線性關系。
2．3穩定性實驗
穩定性試驗結果表明，待測液在5h內穩定，其RSD=0．657％(n=5)。
2．4精密度實驗
精密度試驗結果表明，重復測定5次。結果RSD=0．43％(n=5)。
2．5花椒生物堿含量測定結果
將花椒粉碎至60目，精確稱取3份，每份5g，分別加入95％乙醇進行提取，并用稀鹽酸調節pH值=3，超聲提取1h，過濾，濾液用濃氨水調節至中性，取調節至中性。取2mL，按照以上1．2．3節方法，依次精密溴甲酚綠磷酸緩沖液2mL和10mL氯仿溶液，振搖1min后，倒入分液漏斗中靜置1h，分取氯仿層，在425nm波長下測吸光度值，同法操作的氯仿為空白，測定吸光度。將測得的吸光度值代人標準曲線，計算求得花椒中生物堿的含量為0．95％(RSD=1．02％，n=3)。
3討論
(1)本實驗采用酸性染料比色法，是根據在一定pH介質中，生物堿類與氫離子生成陽離子，一些酸性染料在此條件下可解離成陰離子而與上述陽離子定量結合成有色絡合物，可被有機溶劑定量提取的原理，用白屈菜紅堿作為標準物質在pH值=7．6的條件下與溴麝香草酚藍定量顯色，花椒中的生物堿在此條件下凡能與溴麝香草酚藍顯色的均可被測出，從而求得相對總生物堿的含量。該法靈敏度高，結果穩定，操作簡便，易于推廣應用，用于花椒的質量控制。
(2)由于生物堿成分都易溶于酸溶液，也溶于乙醇，因此在花椒生物堿含量測定中采用酸的乙醇溶液作為提取液，結合超聲提取的方法，可以保證生物堿成分的提取完全。
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