酸性紅B脫色優(yōu)勢菌的篩選將富集培養(yǎng)好的染料脫色菌,涂布于肉湯蛋白胨培養(yǎng)基平板上,30e恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h.根據(jù)菌落形成的透明圈挑選出具有脫色能力的菌株。將挑選出來的菌在肉湯蛋白胨液體培養(yǎng)基中進(jìn)行純培養(yǎng)。取1mL培養(yǎng)液接入5mL含酸性紅B(濃度為0.1g/L)的富集培養(yǎng)液中。靜置培養(yǎng)24h后,測定每株菌脫色能力,從中篩選出脫色能力強(qiáng)的菌株,視為優(yōu)勢菌。
脫色能力的測定細(xì)菌脫色能力用比色法測定。把含酸性紅B的培養(yǎng)液經(jīng)3000r/m,離心20min后,取上清液在酸性紅B的最大吸收峰(518nm)處測定OD值。以未接菌的液體培養(yǎng)基為對照,計算脫色率(D)。
酸性紅B脫色優(yōu)勢菌生長曲線的測定取菌種于肉湯蛋白胨液體培養(yǎng)基中靜止培養(yǎng)12h.此菌液為測定時所用種子培養(yǎng)液。取1mL種子培養(yǎng)液于小試管中,充分搖勻。測定剛接種的培養(yǎng)液OD值(430nm),以未接種的培養(yǎng)液作為空白。每隔一段時間取一只試管測OD值。根據(jù)測定結(jié)果繪制光吸收)培養(yǎng)時間(OD)T)曲線。
酸性紅B脫色優(yōu)勢菌活菌數(shù))光吸收(N)OD)標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定從斜面固體培養(yǎng)基上挑取一環(huán)菌,接種到液體活化培養(yǎng)基中培養(yǎng)。每隔一段時間取出培養(yǎng)物,用比色法測定其吸光度。并進(jìn)行涂布記數(shù)。根據(jù)記數(shù)結(jié)果繪制活菌數(shù))光吸收(N)OD)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
酸性紅B脫色優(yōu)勢菌的初步鑒定對分離、篩選出的酸性紅B脫色優(yōu)勢菌按照一般常用的細(xì)菌鑒定方法手冊和有關(guān)的指導(dǎo)<910>進(jìn)行初步鑒定。酸性紅B脫色優(yōu)勢菌脫色條件的優(yōu)化選擇影響酸性紅B脫色優(yōu)勢菌脫色效率的溫度、pH.、時間三種因素,各因素選擇五個水平,設(shè)計正交實(shí)驗(yàn)<11>進(jìn)行脫色條件優(yōu)化的研究。正交實(shí)驗(yàn)因素及水平。
結(jié)果從黃河河土樣品中分離、篩選得到一株酸性紅B脫色優(yōu)勢菌,24h脫色率為51.5%.命名為DRBD-6.DRBD-6的N)OD標(biāo)準(zhǔn)曲線對DRBD-6進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng),測得的數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析,得出該菌株的N)OD標(biāo)準(zhǔn)曲線,見1.DRBD-6菌株N)OD標(biāo)準(zhǔn)曲線2.2DRBD-6生長曲線DRBD-6生長曲線至穩(wěn)定期如示。
DRBD-6的鑒定結(jié)果個體形態(tài)及染色觀察該菌在肉湯蛋白胨培養(yǎng)基平板上的菌落為圓形,隆起,邊緣整齊,表面光滑,乳脂色,稍透明。個體形態(tài)為桿狀,大小1.0-1.5@1.5Lm,排列方式成對和短鏈為主。芽孢染色陰性,鞭毛染色陰性,革蘭氏染色陰性。
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