2.2以對苯二甲酸為唯一碳源,桿菌F4降解對苯二甲酸的酶活
待測酶活的菌懸液的催化條件,需要加入3g/L磷酸二氫鉀和7g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液,維持體系穩定的pH值=6.8,采用該緩沖溶液配制1g/L的對苯二甲酸溶液。
將底物溶液滅菌后,加熱到37℃,將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中,混合均勻后,在37℃,200r/min下振蕩反應,并開始計時,經過30min后,取出反應液,迅速95℃水浴滅活5min,檢測底物變化:
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將上述反應前后的反應液稀釋50倍,使之在所述線性方程的濃度范圍之內。稀釋后的溶液在240nm波長下,測試反應前后的吸光度分別為1.607和1.472。根據線性方程計算反應前后對苯二甲酸的濃度分別為1.004g/L和0.915g/L;將所得對苯二甲酸的濃度值代入酶活公式(1)中,酶活U=△C/M/△t×103,其中,M為166.13,△t為30,即得到該菌懸液的酶活為:U=0.018。
2.3補加酵母粉為有機氮源,桿菌F4降解對苯二甲酸的酶活
在催化反應液中加入酵母粉作有機氮源可有效催進微生物對碳源的消耗速率,從而提高酶活。為了確定酶活的提高程度,向反應液中加入1g/L的酵母浸出粉,同時加入3g/L磷酸二氫鉀和7g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液,維持體系穩定的pH值=6.8,最后加入對苯二甲酸,配成1g/L的溶液。
將底物溶液滅菌后加熱到37℃,將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中,混合均勻后,在37℃,200r/min振蕩反應,并開始計時。經過30min后,取出反應液,迅速95℃水浴滅活5min,檢測底物變化。
將上述反應前后的反應液稀釋50倍,使之在線性方程的濃度范圍之內。稀釋后的溶液在240nm波長下測試反應前后吸光度分別為1.607和1.341。根據線性方程計算反應前后對苯二甲酸濃度分別為1.004g/L和0.829g/L。
代入公式(1),酶活U=△C/M/△t×103,(其中M為166.13,△t為30)得到菌懸液酶活為:U=0.035。與2.2中結果比較發現,加入酵母粉可將菌懸液的酶活提高將近1倍。
2.4以原兒茶酸為唯一碳源,細菌TJ降解原兒茶酸的酶活
待測酶活的菌懸液的催化條件需要加入4g/L磷酸二氫鉀和6g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液,維持體系穩定的pH值為7左右,因此,采用緩沖溶液配制2g/L的原兒茶酸溶液。
將底物溶液滅菌后加熱到37℃,將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中,混合均勻后,在37℃,200r/min振蕩反應,并開始計時。經過30min后,取出反應液,迅速95℃水浴滅活5min,檢測底物變化。
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