利用微生物產(chǎn)生的纖維素酶將纖維素糖化，再經(jīng)發(fā)酵轉(zhuǎn)化成燃料乙醇，不僅可以充分利用生物質(zhì)資源．更重要的是可以緩解化石能源短缺帶來的全球性能源危機(jī)。
產(chǎn)纖維素酶的微生物主要是真菌中的木霉和曲霉，但這類菌的最大缺點(diǎn)就是Β-葡萄糖苷酶的產(chǎn)量和活力很低．而且對(duì)葡萄糖的耐受性也很差。在纖維素分解過程中，由葡聚糖內(nèi)切酶和葡聚糖外切酶轉(zhuǎn)化生成的纖維二糖若不能被一葡萄糖苷酶及時(shí)地轉(zhuǎn)化為葡萄糖，就很容易形成產(chǎn)物積累．在濃度較高時(shí)就會(huì)抑制纖維素酶的合成。這也是利用木霉等真菌菌株工業(yè)化生產(chǎn)纖維素酶產(chǎn)量或酶活偏低、生產(chǎn)成本偏高的主要原因。
本實(shí)驗(yàn)室保藏的Z28是一株纖維素酶高產(chǎn)菌，是一株罕見的肉座菌(Hypocreasp．)，其Β-葡萄糖苷酶活力相當(dāng)高。本研究對(duì)Z28的最佳生長(zhǎng)及產(chǎn)纖維素酶的液體發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究，以期為將來的工業(yè)化推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1試驗(yàn)內(nèi)容
1．1試驗(yàn)材料
菌種Z28由本實(shí)驗(yàn)室保藏；pNPG(對(duì)硝基酚一B—D一葡萄糖苷)購自Sigma公司；Whatmanl號(hào)定性濾紙購自廣州捷倍思生物科技有限公司：綠色木霉(Trichodemaviride)AS3．2774和AS3．3002由中科院微生物所菌種保藏中心提供。
1．2試驗(yàn)用培養(yǎng)基
生長(zhǎng)培養(yǎng)基：20g葡萄糖，2g(NH4)2S04，2gKH2P04，0．3gMgSO4·7H20，0．3gCaC12，5mgFeS O4.H2O，1．6mgMnSO4，1．7mgZnC12，l000mL水。
種子培養(yǎng)基(PDA)：20g葡萄糖，l000mL馬鈴薯浸汁，pH值不做調(diào)節(jié)。
產(chǎn)酶培養(yǎng)基：2gKH2PO4，2．5g(NH4)2S04，0-3gM04·7H20，0．3gCaC12，5mgFeSO4·7H2O，1．6mgMnSO4，1．7mgZnC12，1．7mgCOC12，lmLTween一20，2g稻稈和麥稈，l000mL水。
1.3試驗(yàn)方法
1.3.1細(xì)菌干重的測(cè)定
將菌體培養(yǎng)液過濾后得到的菌絲置于80℃烘箱中烘干至恒重后稱取質(zhì)量。
1．3．2玎維豢的制箭
將在PDA上培養(yǎng)3d的種子液按2％的接種量接種到產(chǎn)酶培養(yǎng)基上，在溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為160r/min的條件下發(fā)酵5d，離心發(fā)酵液，取其上清液作為試驗(yàn)酶液。
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