酶制劑專一性強(qiáng)，加工效果好，易生物降解，用量較少，環(huán)保無污染，越來越受到人們的歡迎。拋光酶主要用于棉織物除雜和拋光加工，它可以有效地去除織物表面細(xì)小的纖維雜質(zhì)，且對(duì)織物色澤影響小，具有較好的拋光和保色效果。本文以TF一161為例，通過測(cè)定拋光酶的活力，找出最佳酶活測(cè)定條件。同時(shí)用拋光酶對(duì)棉織物進(jìn)行拋光加工，得到最優(yōu)的加工工藝條件，對(duì)實(shí)際生產(chǎn)加工有一定的指導(dǎo)作用。
1酶活的測(cè)定
1．1原理
拋光酶是纖維素酶原液與其它表面活性劑類物質(zhì)的復(fù)配物。在一定溫度和pH值條件下，纖維素酶催化纖維素底物(濾紙、CMC—Na等)水解，釋放出還原糖。在堿性、煮沸條件下，3，5一二硝基水楊酸(DNS試劑)與還原糖發(fā)生顯色反應(yīng)，其顏色的深淺與還原糖(以葡萄糖計(jì))含量成正比。通過在最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)該溶液的吸光度，可得到產(chǎn)生還原糖的量，從而計(jì)算出纖維素酶的濾紙酶活力。
1．2主要試劑和溶液
1．2．1 3，5-二硝基水楊酸(DNS)試劑
試驗(yàn)中所用試劑均為分析純。稱取酒石酸鉀鈉91g，溶于500mL水中，在溶液中依次加入3，5一二硝基水楊酸3．15g和氫氧化鈉2Og，加熱攪拌溶解；再依次加入苯酚(重蒸)2．5g和無水亞硫酸鈉2．5g，攪拌溶解；待全部溶解并澄清后，冷卻至室溫，用水定容至1000mL；過濾，貯存于棕色試劑瓶中，于暗處放置7d后使用。
1．2．2乙酸緩沖溶液
稱取三水乙酸鈉8．16g，溶于約750mL水中，加入乙酸2．31mL，用水定容至1000mL，調(diào)節(jié)溶液的pH值至4．8±0．05，備用。
1．2．3葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液
稱取一定量葡萄糖精確至0．1mg，于(103±2)℃下，烘干至恒重。用水溶解配制成6umol／mL的葡萄糖溶液，用碘量法滴定，得出其準(zhǔn)確濃度。分別吸取不同體積的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液定容，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。
1．2．4快速定性濾紙
杭槲新華一號(hào)濾紙(1cmx6cm，每批濾紙使用前需用標(biāo)準(zhǔn)酶校正)。
1．3設(shè)備與儀器
UV-2450紫外分光光度計(jì)
1．4酶活測(cè)定步驟】
取四支15mL具塞刻度試管(一支空白管，三支樣品管)，將折成M型的濾紙條分別放人每支試管的底部。分別向四支試管中準(zhǔn)確加入相應(yīng)pH值的緩沖溶液1．50mL，并分別準(zhǔn)確加入稀釋待測(cè)酶液0．50mL于三支樣品管中(空白管不加)，使管內(nèi)溶液浸沒濾紙，蓋塞。將四支試管同時(shí)置于(50±0.1)℃水浴中，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)反應(yīng)60min；取出，立即精確地向各管中加入DNS試劑2．0mL，再向空白管中精確加入稀釋的待測(cè)酶液0．50mL，搖勻。將四支試管同時(shí)放人沸水浴中，加熱5min；IR出，迅速冷卻至室溫，加水定容至15mL，搖勻。以空白管(對(duì)照液)調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，在分光光度計(jì)上于500nm波長(zhǎng)下，用10mm比色杯，分別測(cè)量三支平行管中試樣溶液的吸光度，取平均值，以該值查標(biāo)準(zhǔn)曲線，或用線性回歸方程求得還原糖的含量，并根據(jù)定義計(jì)算酶活力值。
[1][2][3][4]下一頁>>
相關(guān)信息 
推薦企業(yè) 推薦企業(yè)
推薦企業(yè)
源經(jīng)編.gif)
您所在的位置：
